Accuracy of a rapid enzyme-linked immunosorbent assay to measure progesterone in mares.

Abstract: The aim of this study was to validate an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for the measurement of progesterone (P4) in mares. Specifically, the objectives were as follows: (1) to determine the specificity and sensitivity of the ELISA test for determination of P4, (2) to measure the potential agreement between the 2 people performing the test, and 3) to evaluate the effect of time on the outcome. Ten mares were sampled on the day before ovulation (D-1), and on days 1 (D1), 3 (D3), and 5 (D5) following ovulation, during the reproductive season. While mares were cycling regularly, estrus was induced by the injection of 5 mg of prostaglandin (PGF2) and monitored starting on the 4th day by daily transrectal palpation and ultrasonography to determine the time of ovulation. Blood was collected and all samples (n=96) were assayed for P4 by a semiquantitative ELISA, by chemiluminescent immunoassay, and by radioimmunoassay (RIA). Based on the RIA, values of P4 on D-1, D1, D3, and D5 were significantly different (P < 0.0001) with mean and standard deviation(s) of 0.004, s = 0.52; 2.05, s = 2.58; 8.37, s = 4.17; and 12.76, s = 4.00 ng/mL respectively. The sensitivity and specificity of the semiquantitative assay were 94% and 95%, respectively for the lowest values of P4 (< 1.0 ng/mL). The value of kappa was 0.90 between 2 individuals performing the test. In conclusion, these results suggest that the semiquantitative test may be used reliably and economically to evaluate P4 levels in equine plasma in the clinical Le but de cette étude était de valider un titrage immunoenzymentique utilisant un antigène adsorbé (ELISA) pour mesurer la progestérone (P4) chez des juments. Plus spécifiquement, les objectifs étaient les suivants : 1) préciser la spécificité et la sensibilité du test ELISA pour déterminer la P4, 2) mesurer la concordance potentielle entre les 2 personnes qui effectuent le test et 3) évaluer l’effet du temps sur les résultats. Au cours de la saison de reproduction, dix juments ont été échantillonnées le jour précédent l’ovulation (J-1) et aux jours 1 (J 1), 3 (J 3) et 5 (J 5) suivant l’ovulation. Alors que le cycles ovariens se déroulait normalement, l’œstrus était provoqué par l’injection de 5 mg de prostaglandine (PGF2) et suivi à partir du 4 jour par palpations transrectales et échographies quotidiennes pour déterminer le moment de l’ovulation. La P4 de tous les échantillons de sang récoltés ( = 96) a été déterminée par ELISA semi-quantitatif, par essai immunologique chimioluminescent et par essai radioimmunologique (ERI). Selon les résultats obtenus par ERI, les valeurs de P4 aux J-1, J 1, J 3 et J 5 étaient significativement différentes ( < 0,0001) avec moyennes et écarts-types respectifs de 0,004, = 0,52; 2,05, = 2,58; 8,37, = 4,17 et 12,76, = 4,00 ng/ml. La sensibilité et la spécificité des dosages semi-quantitatifs étaient respectivement de 94 % et 95 % pour les valeurs les plus basses de P4 (< 1,0 ng/ml). La valeur de kappa était de 0,90 entre les 2 individus réalisant le test. En conclusion, ces résultats suggèrent que le test semi-quantitatif peut être utilisé de façon fiable et économique pour évaluer les niveaux de P4 dans le plasma équin en situation clinique. (Traduit par Docteur André Blouin)