Toll-like receptor-ligand induced thymic stromal lymphopoietin expression in primary equine keratinocytes.

Abstract: Thymic stromal lymphopoietin (TSLP) plays a key role in the development of allergic inflammation. Little is known about possible triggers of equine TSLP expression. Objective: To investigate TSLP expression in equine insect bite hypersensitivity (IBH) skin lesions. The capacity of TLR 1-8 ligands (L) and of atopic cytokine milieu as potential triggers of TSLP and of interleukin (IL)-6 as a downstream effector molecule of TLR signalling, were examined in primary equine keratinocyte cultures. Methods: Lesional skin from IBH-affected and healthy skin from control-horses (n = 9 each group) was sampled. Methods: Keratinocyte cultures were established from six healthy horses and stimulated with TLR 1-8-L, and with IL-4 and tumor necrosis factor-α, to mimic an atopic inflammation cytokine milieu. TSLP and IL-6 gene expression was assessed by quantitative real-time PCR. Results: Expression of TSLP was significantly greater in IBH lesions compared to healthy skin. TLR 1-8-L significantly upregulated TSLP expression in keratinocytes. The strongest upregulation was induced by TLR 1/2-L and TLR 3-L. Combination of atopic cytokine milieu and TLR 1/2-L or TLR 3-L further increased TSLP expression. TLR-L 1-5 stimulation significantly upregulated IL-6 expression. Conclusions: The data herein suggest that the upregulation of TSLP expression in lesional skin of IBH-affected horses might play a role in IBH development. Moreover, TSLP expression is induced by TLR-L, in particular by TLR 1/2-L and TLR 3-L, and is further increased by atopic cytokine milieu, indicating a mechanism for TSLP-mediated exacerbation of IBH. Background: Le TSLP (Thymic stromal lymphopoietin) joue un rôle clé dans le développement de l'inflammation allergique. On en sait peu sur les facteurs possibles d'expression de TSLP chez le cheval. HYPOTHÈSES/OBJECTIFS: Étudier l'expression de TSLP dans les lésions cutanées de l'hypersensibilité aux piqures d'insectes (IBH) chez le cheval. La capacité des ligands TLR 1-8 (L) et des cytokines atopiques comme déclencheurs potentiels de TSLP et d'interleukine (IL)-6 comme molécule effectrice de régulation du signal TLR, ont été examinés dans des cultures de kératinocytes équins primaires. Unassigned: La peau lésionnelle d’IBH atteints et de peau saine de chevaux contrôles (n=9 pour chaque groupe) a été prélevée. MATÉRIEL ET MÉTHODES: Les cultures de kératinocytes ont été réalisées à partir de six chevaux sains et stimulés par TLR 1-8-L, et avec IL-4 et TNF-α, pour mimer une inflammation atopique. L'expression des gènes de TSLP et IL-6 a été déterminée par PCR quantitative en temps réel. RÉSULTATS: L'expression de TSLP est significativement plus élevée dans les lésions d’IBH comparé à la peau saine. Les TLR 1-8-L ont significativement augmenté l'expression de TSLP dans les kératinocytes. L'augmentation de régulation la plus marquée était induite par TLR 1/2-L et TLR 3-L. La combinaison de milieu de cytokine atopique et TLR 1/2-L ou TLR 3-L augmente davantage l'expression de TSLP. La stimulation de TLR 1-5 a significativement augmenté l'expression d’IL-6. Unassigned: Les données ci dessus suggèrent que l'augmentation de régulation de l'expression de TSLP dans les lésions cutanées de chevaux atteints d’IBH pourrait jouer un rôle dans le développement d’IBH. En outre, l'expression de TSLP est induite par TLR-L, en particulier par TLR 1/2-L et TLR 3-L, et est d'autant plus augmenté que le milieu de cytokine atopique, indiquant un mécanisme d'exacerbation d’IBH médié par TSLP. INTRODUCCIÓN: la linfopoyetina del estroma tímico (TSLP) desempeña un papel clave en el desarrollo de la inflamación alérgica. Poco se sabe sobre posibles desencadenantes de expresión de TSLP equina. HIPÓTESIS/OBJETIVOS: investigar la expresión de TSLP en lesiones cutáneas de hipersensibilidad por picadura de insecto en equinos (IBH). Se examinaron la capacidad de los ligandos TLR 1-8 (L) y del medio de citoquinas en atopia como posibles desencadenantes de TSLP y de interleuquina (IL) -6 como una molécula efectora posterior a la señal estimulante de TLR en cultivos primarios de queratinocitos equinos. ANIMALES: se tomaron muestras de piel lesionada de caballos con IBH y de piel sana de caballos control (n = 9 cada grupo). MÉTODOS Y MATERIALES: se establecieron cultivos de queratinocitos a partir de seis caballos sanos y se estimularon con TLR 1-8-L, y con IL-4 y factor de necrosis tumoral-α, para imitar un medio de citoquinas en inflamación en atopia. La expresión del gen TSLP e IL-6 se evaluaron por PCR cuantitativa en tiempo real. RESULTADOS: la expresión de TSLP fue significativamente mayor en los queratinocitos de lesiones de IBH en comparación con los de la piel sana. TLR 1-8-L aumentó significativamente la expresión de TSLP en queratinocitos. La regulación positiva más fuerte fue inducida por TLR 1/2-L y TLR 3-L. La combinación del medio de citoquinas en atopia y TLR 1/2-L o TLR 3-L aumentó aún más la expresión de TSLP. La estimulación de TLRL 1-5 aumentó significativamente la expresión de IL-6. CONCLUSIONES E IMPORTANCIA CLÍNICA: los datos en este documento sugieren que la regulación positiva de la expresión de TSLP en la piel lesionada de los caballos afectados por IBH podría desempeñar un papel en el desarrollo de IBH. Además, la expresión de TSLP es inducida por TLR-L, en particular por TLR 1/2-L y TLR 3-L, y aumenta aún más por medio de citoquinas en atopia, lo que indica un mecanismo para la exacerbación de signos clínicos de IBH mediada por TSLP. Unassigned: Das Thymic Stromal Lymphopoietin (TSLP) spielt eine Schlüsselrolle bei der Entwicklung allergischer Entzündung. Es ist wenig bekannt über die möglichen Auslöser der Exprimierung des equinen TSLP. Unassigned: Das Ziel war eine Untersuchung der TSLP Exprimierung in Hautveränderungen bei der Insektenstich Hypersensibilität des Pferdes (IBH). Die Fähigkeit von TLR 1-8 Liganden (L) und des atopischen Zytokinmilieus als mögliche Auslöser von TSLP und von Interleukin (IL)-6 als Downstream Effektor Molekül für die TLR Signalgebung wurden in primären Keratinozytenkulturen von Pferden untersucht. Unassigned: Es wurden Läsionen der Haut von Pferden mit IBH und gesunder Haut von Kontrollpferden (n = 9 in jeder Gruppe) untersucht. Unassigned: Es wurden Keratinozytenkulturen von sechs gesunden Pferden hergestellt und mit TLR 1-8-L, mit IL-4 und Tumor Nekrose Faktor-α stimuliert, um das Zytokinmilieu einer atopischen Entzündung zu imitieren. Die TSLP und IL-6 Genexprimierung wurde mittels quantitativem Real-Time PCR untersucht. Unassigned: Die Exprimierung von TSLP war in IBH Läsionen im Vergleich zur gesunden Haut signifikant höher. TLR 1-8-L erhöhte die TSLP Exprimierung in den Keratinozyten signifikant. Die stärkste Erhöhung wurde von TLR 1/2-L und TLR 3-L induziert. Eine Kombination des atopischen Zytokinmilieus und TLR 1/2-L oder TLR 3-L erhöhte die TSLP Exprimierung noch deutlicher. Die TLRL 1-5 Stimulierung erhöhte die IL-6 Exprimierung signifikant. Unassigned: Diese Ergebnisse weisen darauf hin, dass die Erhöhung einer TSLP Exprimierung in läsionaler Haut bei IBH-betroffenen Pferden eine Rolle bei der Entwicklung der IBH spielen könnte. Darüber hinaus wird die TSLP Exprimierung durch TLR-L induziert, vor allem durch TLR 1/2-L und TLR 3-L und wird durch ein atopisches Zytokinmilieu weiter erhöht, was auf den Mechanismus einer TSLP-vermittelten Verschlimmerung der IBH hinweist. 背景: 胸腺間質性リンパ球新生因子(TSLP)は、アレルギー性炎症の発症に重要な役割を果たす。馬のTSLP発現のトリガーの可能性についてはほとんど知られていない。 仮説/目的: 本研究の目的は、馬の昆虫刺咬性過敏症(IBH)の皮膚病変におけるTSLP発現を調査することである。 TLRシグナル伝達の下流エフェクター分子としてのTSLPおよびインターロイキン(IL)-6の潜在的トリガーとしてのTLR 1-8リガンド(L)およびアトピー性サイトカイン環境の能力を、一次馬ケラチノサイト培養で調査された。 被験動物: IBHに罹患した馬の病変皮膚および対照馬の健常皮膚(n = 9各グループ)をサンプリングした。 材料と方法: ケラチン生成細胞培養を、6頭の健常馬によって確立し、TLR 1-8-L、IL-4および腫瘍壊死因子-αで刺激し、アトピー性炎症サイトカイン環境を模倣した。 TSLPおよびIL-6遺伝子発現を、定量リアルタイムPCRにより評価した。 結果: TSLP発現は、健常皮膚と比較してIBH病変において有意に多かった。 TLR 1-8-Lは、ケラチン生成細胞におけるTSLP発現を有意に上方制御した。最も強いアップレギュレーションは、TLR 1 / 2-LおよびTLR 3-Lによって誘導された。アトピー性サイトカイン環境およびTLR 1 / 2-LまたはTLR 3-Lの組み合わせは、TSLP発現をさらに増加させた。 TLRL 1-5刺激は、IL-6発現を有意にアップレギュレートした。 結論と臨床的重要性: 本データは、IBHに罹患した馬の病変皮膚におけるTSLP発現の上方制御がIBHの発生に役割を果たす可能性があることを示唆している。さらに、TSLP発現は、TLR-L、特にTLR 1 / 2-LおよびTLR 3-Lによって誘導され、アトピー性サイトカイン環境によってさらに増加し​​、TSLPを介したIBHの増悪メカニズムを示している。. 背景: 胸腺基质淋巴生成素(TSLP)在过敏性炎症发生过程中起关键作用。目前对马的TSLP表达的可能触发因素知之甚少。 假设/目的: 研究TSLP在马昆虫叮咬超敏反应(IBH)皮肤病变中的表达。在初代马角质细胞培养基中,研究TLR1-8配体(L)和异位性细胞因子环境作为TSLP的潜在触发因子,以及白介素(IL)-6作为TLR信号下游效应分子的能力。 动物: 采集IBH的病变皮肤和对照组马的健康皮肤(每组9例)作为样本。 方法和材料: 从六匹健康马身上制备角质细胞培养基,给予TLR1-8-L、IL-4和肿瘤坏死因子-α刺激,模仿异位性炎症细胞因子环境。实时荧光定量PCR检测TSLP和IL-6基因表达。 结果: 与健康皮肤相比,TSLP在IBH病变中的表达明显增加。TLR1-8-L显著上调TSLP在角质细胞中的表达。其中TLR1/2-L和TLR3-L诱导上调最强。异位性细胞因子环境与TLR1/2-L或TLR3-L联合进一步增加了TSLP的表达。TLRL1-5刺激显著上调IL-6的表达。 结论和临床意义: 本文数据表明,IBH患马病变皮肤中的TSLP表达上调,可能在IBH的发生过程中发挥作用。此外,TSLP的表达由TLR-l诱导,尤其是TLR1/2-L和TLR 3-L,并在异位性细胞因子环境中进一步增加,提示TSLP介导IBH加重的机制。. Unassigned: A linfopoietina estromal tímica (TSLP) desempenha um papel fundamental no desenvolvimento da inflamação alérgica. Pouco se sabe sobre possíveis gatilhos da expressão de TSLP em equinos. HIPÓTESE/OBJETIVOS: Investigar a expressão de TSLP em lesões cutâneas de hipersensibilidade à picada de inseto (IBH) em equinos. A capacidade dos ligantes TLR 1-8 (L) e do meio de citocinas atópicas como potenciais gatilhos da TSLP e da interleucina (IL) -6 como uma molécula efetora a jusante da sinalização de TLR, foram examinados em culturas primárias de queratinócitos equinos. Unassigned: Coletou-se a amostras de pele lesional de equinos afetados por IBH e a pele saudável de cavalos controle (n = 9 cada grupo). MÉTODOS E MATERIAIS: Culturas de queratinócitos foram iniciadas a partir de material de seis equinos saudáveis ​​e estimuladas com TLR 1-8-L, IL-4 e com fator de necrose tumoral-α, para imitar um meio de citocina de inflamação atópica. A expressão do gene TSLP e IL-6 foi avaliada por PCR quantitativo em tempo real. Results: A expressão de TSLP foi significativamente maior nas lesões de IBH em comparação com a pele saudável. TLR 1-8-L aumentou positivamente a expressão de TSLP nos queratinócitos. Maior regulação positiva foi induzida por TLR 1/2-L e TLR 3-L. A combinação do meio de citocinas atópicas e TLR 1/2-L ou TLR 3-L aumentou ainda mais a expressão de TSLP. A estimulação com TLRL 1-5 aumentou significativamente a expressão de IL-6. CONCLUSÕES E IMPORTÂNCIA CLÍNICA: Os dados do presente estudo sugerem que a regulação positiva da expressão de TSLP na pele lesional de cavalos afetados por IBH pode desempenhar um papel no desenvolvimento da IBH. Além disso, a expressão de TSLP é induzida por TLR-L, em particular por TLR 1/2-L e TLR 3-L, e é ainda aumentada pelo meio de citocinas atópicas, indicando um mecanismo para a exacerbação da IBH mediada por TSLP.